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原核蛋白表达与纯化服务

 

服务简介:

目前,原核蛋白表达系统是最成熟可靠的蛋白表达系统,适合于快速表达纯化各种不同来源的蛋白。大量制备的重组蛋白可用于药物筛选、结构生物学研究、细胞生物学研究、蛋白质组学研究等生物医学领域。摩尔生物公司通过筛选测试表达载体与表达菌株、优化表达体系及诱导表达条件、摸索包涵体复性条件等,极大程度地解决了蛋白难以可溶表达纯化等难题。摩尔生物向广大客户提供专业的蛋白表达纯化外包技术服务,包括表达质粒构建、原核蛋白表达纯化、真核蛋白表达纯化、以及蛋白纯化后除菌去内毒素分装、纯度检测等服务,并提供各种检测报告。

 

主要步骤           内容           交付内容      交付时间
目标基因
全基因合成
1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列;
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化;
3. 合成设计好的基因序列。          

目的基因 (在T载体或常规穿梭载体上)及测序报告

≤ 150bp       10个工作日左右

150-2000bp  12-17 个工作日左右

2000-4000bp 18-22个工作日起

> 4000bp       协商

目标基因
亚克隆

1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒;
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上;
3. 测序验证构建质粒的准确性;
4. 可提供表达载体。

正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告

有模板: 2-3周

无模板: 4周

E. coli 表达菌株转化及筛选

1. 扩增并抽提构建好的表达质粒;
2. 将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中;
3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件,SDS-PAGE 检测蛋白表达情况,筛选出合适菌株;
4. 可提供表达菌株: JM109、BL21 (DE3)、Rosetta(DE3)等。

重组质粒的表达菌株及表达检测报告 2-3周
目标蛋白
表达及纯化

1. 对时间、温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化,诱导表达目标蛋白;
2. 摇瓶培养1L重组细菌,通过亲和、离子交换、疏水及凝胶过滤等层析方法纯化表达的重组蛋白;
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签(Tag),再纯化获得所需的目标蛋白(可选,构建表达载体需 加入合适的蛋白酶切位点);
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量;
5. .通过Western-blot验证目标蛋白正确性(可选)。

纯化好的目标蛋白1mg以上及纯化报告,可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度最高可达95%以上。 客户提供诱导条件:2-3周
若未提供摸索条件,需要额外增加1周左右时间(不含western blot的时间)
目标蛋白
再加工及详细检测

1. 对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究;
2. 内毒素去除、除菌、冻干等进一步加工;
3. 通过HPLC、质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。

加工后的终产品及相关实验和检测报告 2-3周
大规模制备

按照小试工艺放大生产规模,制备客户需要的合格蛋白产品。

合格的目标蛋白及服务报告 协商